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现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等,是分析有机化合物含氮量的常用方法。 定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右(12%~一19%),因此,通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质),即: 蛋白质含量=含氮量/16%。
定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。
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原子吸收分光光度法的测量对象是呈原子状态的金属元素和部分非金属元素,是由待测元素灯发出的特征谱线通过供试品经原子化产生的原子蒸气时,被蒸气中待测元素的基态原子所吸收,通过测定辐射光强度减弱的程度,求出供试品中待测元素的含量。
原子吸收分光光度法(AAS)简称原子吸收法,是利用被测元素基态原子蒸气对其共振辐射线的吸收特性进行元素定量分析的方法。原子吸收分光光度法具有以下特点:
①灵敏度高:常规分析法对大多数元素可达到ppm级;利用特殊手段可达到ppb级的浓度范围;
②精密度好:一般测定RSD约为1%~3%,利用特殊方法精密度可小于1%。
③应用范围广:周期表中70多种元素可利用该法测定:
④干扰少:原子吸收光谱为分立的锐线光谱,且谱线重叠性少,干扰性小;
⑤试样用量少:采用石墨炉无火焰原子吸收法,每次测量仅需5~20μl试液或0.05~10mg的固体试样;
⑥快速简便,易于自动化:液体试样常可直接进样,一般样品无需进行预分离处理,新型号商品仪器的进样和测定步骤全部自动化完成。
原子吸收分光光度法应用的主要限制是:该法只能进行无机元素的含量分析,不能直接用于有机化合物的含量分析和结构分析;另外,常规原子吸收分光光度法每测一种元素,要更换一次空心阴极灯光源,不能同时进行多元素分析。
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