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为了进行CIP暴露实验, 在4个相同的工作体积均为3 L的SBR反应器内, 分别加入等体积从母反应器(稳定运行时期)内排出的污泥混合物.运行适应1个星期之后, 向4个SBR反应器中投加适量的CIP储备液, 控制CIP浓度分别为0(空白)、0.05、0.5、5 mg · L-1.其余操作条件及加入合成废水含量和组分均与上述SBR序批式反应条件相同.短期暴露的时间为1个周期(8 h), 在1个周期内每30 min测一次出水中的NH4+-N、NO3--N、NO2--N、PO43--P、PHA和糖原质含量, 同时测定污泥活性和LDH的释放量, 以此来反映不同浓度CIP对SBR的影响.长期暴露实验则是在每个周期反应器中加入不同浓度的CIP, 每2 d测定一次出水中NH4+-N、NO3--N、NO2--N、PO43--P含量变化, 来说明不同浓度CIP对SBR的长期影响.运行90 d之后, 通过测定一个周期内上述指标及PHA、糖原质含量、污泥活性和LDH释放量来反映CIP对SBR的影响机理.为了进一步研究CIP对污泥微生物的影响, 同时对相关酶活性进行测定.
NH4+-N、NO3--N、NO-2-N、PO43--P、SVI、COD、混合液悬浮固体(MLSS)和混合液挥发性悬浮固体(MLVSS)根据标准方法进行分析(APHA, 1998).糖原的测定采用液相色谱法(Agilent 1200, USA), 具体操作参照文献内容(Pijuan et al., 2010).胞内聚合物聚羟基脂肪酸酯(PHA)采用气相色谱法进行测定, PHA的测定包含聚羟基丁酸酯(PHB)、聚羟基戊酸酯(PHV)、聚羟基戊酸甲酯(PH2MV), 具体方法参照文献(Chen et al., 2015).相关酶包括磷酸激酶(PPX)、外切聚磷酸酶(PPK)、氨单加氧酶(AMO)、硝酸还原酶(NAR)和亚硝酸盐还原酶(NIR)的测定参照相关文献(Louvet et al., 2010).LDH的释放量采用细胞毒性检毒箱(瑞士罗氏分子生化药剂)进行检测, 污泥活性采用细胞计数箱(日本同仁化学研究所)进行检测, 使用方法均依据厂商说明.
活性污泥中硝化菌以亚硝化单胞菌属(Nitrosomonadales)为主, 其在反应器中的含量随温度呈先上升后下降的趋势, 在35℃占微生物总量的2.97%, 40℃时达到 值4.55%, 45℃下降至1.97%, 说明40℃以下硝化菌是能够生长的, 当温度为45℃时硝化菌生长被抑制, 甚至部分解体后流失.陈青青分别在20℃和25℃下测定了硝化污泥中的硝化菌含量, 发现20℃的硝化菌含量略高于25℃的.周玲玲等在30℃和15℃下研究温度对硝化作用的影响, 发现30℃硝化菌含量是15℃的2~3倍.这些研究结果均表明温度会影响硝化菌的含量, 但其受温度影响的变化规律还需进一步研究.
上述结果表明, 好氧池活性污泥以假单胞菌属(Pseudomonadales)和伯克氏菌属(Burkholderiales)为主; 当温度大于40℃时, Burkholderiales增加, 亚硝化单胞菌属(Nitrosomonadales)含量下降, 温度过高不适合硝化菌生长.
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